奶牛鮮乳中黃曲黴毒素Ml的產生及危害 黃曲黴毒素Ml的檢測方法

奶牛生鮮乳中含有（yǒu）過高的黃（huáng）曲黴毒（dú）素（sù）M1主要是（shì）由於其采食（shí）大（dà）量發生黴變的飼料、飼草,導致體內（nèi）含有大量的黃曲黴毒（dú）素（sù）B1,通過體內代謝生成（chéng）黃曲黴毒素M1,並存（cún）在於肝髒、腎髒、乳腺以及乳（rǔ）汁中,且經（jīng）過24 h就能夠（gòu）檢測到牛（niú）奶（nǎi）中存在黃曲黴毒素M1.現主要介紹奶牛鮮乳中黃曲黴毒素Ml的產生（shēng）及危害 黃曲黴（méi）毒素Ml的檢測方法，大家一起（qǐ）來具體了解一下：

1、產生及危害

哺乳類動物主要是采食汙染有黃曲（qǔ）黴毒素Bl的飼料或者食品而導致分泌的乳汁中（zhōng）含有黃曲黴毒素Ml。一般來說，農作物在生長過程中遇到各中自（zì）然災害，如幹旱、早霜、蟲害（hài）、倒伏等，以及收獲後在加（jiā）工、運輸、儲藏過程（chéng）中不合理（lǐ），如貯藏濕度大等，都容易感染黃曲黴菌。在溫度、濕度（dù）適宜的條件下，就會（huì）生（shēng）成一定數量的黃曲黴菌，黃曲黴毒素就是其產生的代謝物。

奶牛采食汙染有黃曲黴毒素Bl的（de）飼料後，進入的黃（huáng）曲黴毒（dú）素Bl就會與微生物逐漸產生相互作用，其中10%作用的毒（dú）素能夠在瘤胃內菌群的作用下發生降解，其（qí）他部（bù）分毒素即會被瘤胃吸收進入血液，並在體（tǐ）內的肝微粒（lì）體單（dān）氧化酶係的催化下，經由細胞色素P-　450的調節，導致黃（huáng）曲黴毒素Bl末端存在（zài）的呋喃環C-10發生羥基化而生成黃曲黴毒素Ml。由於黃曲黴毒素Ml沒有活性（xìng），從而能夠直接經由尿（niào）液排到（dào）體外，或者結合葡萄糖醛酸基轉移酶而經由（yóu）糞便排到體（tǐ）外或者通過乳（rǔ）汁排到體外，還有部分能夠殘留在肌肉內。

進入動物（wù）或者人類（lèi）體內的黃曲黴毒素Ml，不僅能（néng）夠抑製合成RNA、DNA，還（hái）能夠抑製肝（gān）髒合成蛋白質，引起機體中（zhōng）毒，主要表現在以下三個方麵（miàn），即損（sǔn）傷組織器官；抑製免疫功能；致畸（jī）、致（zhì）癌、致突（tū）變，導致人類和動物發生胃癌、腎癌和肝癌等。

2、檢測方法

薄層色（sè）譜法(TLC)。該方法是測定牛奶中黃曲黴毒素Ml含量的經典方法，是一種比較定（dìng）性或者半定（dìng）量的檢測方法。其原理（lǐ）是對牛奶（nǎi）樣品進行提取、濃縮、薄層分離後，使黃曲黴毒素Ml能夠在36b　nm波長的紫外（wài）光下發出藍紫色熒光，從而根據標（biāo）準溶液的熒光強度以及其在薄層板上（shàng）表明的（de）熒光最低檢出量相比較，進而計（jì）算其含量。分析時，先配製黃曲黴毒素Ml標準溶液，即使用三氯甲烷配製濃度為10　;ug／mL的黃曲黴毒（dú）素Ml標準（zhǔn）溶液，置於3b7　nm波長（zhǎng）的紫（zǐ）外分光光（guāng）度計中測定該標準溶液的準確濃度，然後（hòu）放置（zhì）在4℃條件下進行避光（guāng）保存、備用。接著提取樣品，即直接將液體樣品添加在（zài）甲醇中，經過振蕩後（hòu）過濾的（de）提取液。提取液可先（xiān）用氯化鈉溶液和石油醚進行分配淨化，接著使用三氯甲烷進行轉相提取，再使用氯化鈉溶液（yè）進行水洗，然後使用無水硫酸鈉進行脫水，並收集三氯甲烷層放在65℃水（shuǐ）浴中，保持通風良好，使其逐漸揮幹，最後將蒸（zhēng）發皿（mǐn）中的殘留物（wù）通過三氯甲烷轉移到濃縮管內，並經過減壓吹氣（qì）法使該溶液濃縮到適（shì）當體積後備（bèi）用。點樣層（céng）析、展開、測定，即（jí）分（fèn）別取10uL標準液和樣品用濃縮液，並點滴在矽膠G薄層板（在105℃經過2h活化）上，放在展析缸（提前添加一定量的展開劑）中展開，注意縱展和橫展相結合，待揮幹後（hòu）置於（yú）紫外（wài）燈下進（jìn）行觀察，並測量其Rf值，通常黃曲黴毒素Ml的Rf值是o．34，還要同標（biāo）準溶液的最低檢出量(0.　0004　;ug)的熒光強度進行比較（jiào），同時在熒光點處噴灑適量的硫酸溶液(1：3)顯色劑（jì），用於確證試驗，最後根據標準溶（róng）液（yè）最低（dī）檢出量、樣品稱量值、濃縮體積（jī）以及（jí）總稀釋倍數進行計算黃曲黴毒素M1含量。

SNAP法（fǎ）。主要是根據酶聯免（miǎn）疫競爭原理，即樣品中含有的黃曲黴毒素Ml同定量特異性酶標抗體發生反應（yīng），多餘的遊離（lí）酶標抗（kàng）體就會同酶標板內（nèi）的包（bāo）被抗原相結合，經（jīng）過流動洗滌後添加適量的酶顯色底物進行顯色，最後與標準點進行比較定（dìng）性。檢測前，要先打開SNAP加熱器和黃曲黴毒素Ml檢測讀數儀進行預熱，SNAP加熱器的（de）溫度（dù）適宜達到(45±5)℃，接（jiē）著將裝（zhuāng）在包裝內的黃曲黴毒素Ml檢（jiǎn）測試劑盒取出、備用；待檢測（cè）的生鮮（xiān）乳溫度適宜控製在15　-　30℃之間，並（bìng）按照順序將其排好。調節加熱器的（de）加熱時（shí）間和反應時間，分別為5　min、4　min。檢測時（shí），先將待（dài）測（cè）生鮮乳搖勻，接著將黃曲黴毒素Ml檢測試劑盒內的配套吸管取出，在試（shì）劑瓶中添加(450±50uL)標準線的待測奶樣，然（rán）後搖晃試管促使反應試（shì）劑球完全融化，之後將試管放在已經預熱的加熱器中，對樣本進（jìn）行5　min孵化，接著（zhe）立即取出樣品試管（guǎn），並將其中的（de）樣本添加到SNAP試劑（jì）盒樣品孔中，樣本通過反應窗朝向反應激活環流（liú）動。待綠色（sè）反應環即將發生（shēng）退色時，要立即用力按下反應激活鍵，使其與SNAP試劑盒持平，聽到清（qīng）脆的按扣聲後要按下反應鍵，經過4　min反應，將SNAP試劑盒取下，置於讀數儀下調成快速讀數一抗生素類一讀數，要求（qiú）在（zài）反應完成後的10　min之內讀完。讀數儀（yí）讀數在1.05以上，則檢測結果為陽性；讀數在1.　05以下，則檢測結果為（wéi）陰性。另外，還要（yào）注意對試劑盒樣（yàng）品點和參照點的顏色變化及深淺度進行觀察（chá），如果樣品點顏色淺於參照（zhào）點，結果即（jí）為（wéi）陽性；樣品點顏色等於或者深於參照點（diǎn），結果即為陰性。如果（guǒ）參照點顏（yán）色（sè）沒有發生變化，則要重新對樣品進行檢測，而對於結果為陽性的（de）樣品還需（xū）要（yào）采取定量法進行進一步確認。