影響羊胚胎移植受（shòu）胎率的主要因素

袁東波1 尹（yǐn）念春2 陳家樹3

1.四川省（shěng）南充市動物疫病預防控製中心，四川南充637000；

2.四川（chuān）省遂寧市動物疫病預防控製中心，四川遂寧629000；

3.四川省南充市農牧（mù）局，四川南充637000

收（shōu）稿日（rì）期：2014-07-10

袁東波，男，1980年生，預防獸醫學碩士。

近年來，為大力（lì）發展養羊產業，豐富我國優質羊（yáng）品種資源，減少從國外直接引種的（de）風險，羊胚胎移植技（jì）術廣泛應用於養羊生產實踐，在（zài）羊純種快（kuài）速擴繁中取得了良好的效果（guǒ），然而羊胚胎（tāi）移植受胎（tāi）率一直是製約羊純種快速擴繁的重要因素，受到大家的關注。本文針對影響羊胚胎移植受胎率的主要因素進行了分析。

1 供卵及胚（pēi）胎質量

供卵及胚胎質量對移植能否成功（gōng）關係（xì）密切。即使密切同期化的供受體，如（rú）果移植了異常胚胎，如細胞卵裂不規則、細胞固縮、細胞發（fā）育遲緩等，移（yí）植（zhí）後也會失敗。因此，在胚胎移（yí）植過程（chéng）中，對胚胎質量的鑒定十分重要。

1.1 供體羊的年（nián）齡不同，卵的質量不同

成年母羊（yáng）排卵移植後的成功率大於育成羊（yáng）。在體（tǐ）外培養條件下，成年母羊的胚胎比初情（qíng）期前幼齡母羊（5~7 月齡）的胚胎正常發育的比（bǐ）例大（dà），發育快（kuài），有（yǒu）較強的生命力。

1.2 成年母羊（yáng）處理前的激（jī）素內環境

在（zài）性周期的第（dì）16 天注射孕馬血清（qīng）促性腺激素（PMSG）後獲（huò）得的卵，有90%以上為受精卵，而（ér）在性周期的第10 天注（zhù）射PMSG 後獲得的卵，其受精卵則低於90%。所以（yǐ）成年母羊處理前的激素內環境決定排卵時的卵泡刺激發生時（shí）間（jiān）。當卵泡（pào）受刺（cì）激時，孕酮水平及其存在的時間長短，可能是決定卵質量的重要因素。

1.3 誘發超數排卵時的卵巢反應

超（chāo）數排卵後卵受精率低，則胚胎采（cǎi）集率（lǜ）和移植（zhí）妊娠率也低。受精率低經常發生在某一頭供體所排的卵中，甚至出現所有卵都不受精（jīng）的現象。卵（luǎn）子不受精的原因，可能由於超數排卵時引起（qǐ）母畜（chù）內分泌紊亂，排出不成熟的卵子。就胚胎質量而言，每個卵巢排8~10個卵為合適。

1.4 哺乳期泌乳母羊排（pái）卵數較少（shǎo）

帶（dài）羔哺乳母（mǔ）羊的胚胎比幹乳期母羊胚胎的生命力低，把這兩種母羊的（de）胚胎相互交換移植（zhí）後結果表明，不育的原因出現在供（gòng）體。

1.5 不同個體對激素的（de）反應（yīng）差異

在相同的飼（sì）養管理（lǐ）條件下，當注（zhù）射同等劑量的促性（xìng）腺激素時，有的個體超（chāo）排效果很好，排卵很多；有的起不到超數排卵的效果，隻排1 個卵；有的沒（méi）有發情表現，甚至不排卵。從胚（pēi）胎培養實驗表明，不同個體的卵，雖處於相同的發育階段，且在同樣的培養條件下，但卵的活力差異大。經驗認為一隻供體經過超數排卵處理後，當采集（jí）到較多的受精卵，且卵的（de）發育階段較（jiào）為一致時，把這些胚胎移植後（hòu），常可獲得（dé）較高的受胎率，對這樣的母羊可（kě）重複采卵和移植。

1.6 季節對超排效果和卵質量的影響

實驗表明秋末冬初效果最（zuì）佳，早春次之（www.znjjhypt.com），夏（xià）季最差。

2 胚胎發（fā）育階段與移植部位

2.1 受體的妊娠率隨移植胚胎日（rì）齡的增加而（ér）相應提高

3 日齡胚胎的移植妊娠率最低，5 日齡（líng）以後的（de）胚胎對逆境（如溫度的驟變）的耐受力（lì）較好。有研究表（biǎo）明，實際胚齡（或者說是子宮環境）4 日齡胚胎移植（zhí）到受體發情3 天的子（zǐ）宮中比3 日齡胚胎（tāi）移植到發（fā）情（qíng）3 天的子宮中有更高的胚胎存活率（lǜ）。

2.2 母羊發情的生殖道內部形態（tài）和生理機能變化

羊的早期胚胎在輸卵管內運行滯（zhì）留的時間（jiān）約72 h左右，所以（yǐ）72 h前采到的早期胚胎應移入輸卵管內；超過72 h，胚胎進（jìn）入子宮，由子宮（gōng）采到的早期胚（pēi）胎應移（yí）入子宮內。有實驗指出為了提高輸（shū）卵管移植胚胎的生存率，滿足在發情後72 h或更晚時間采胚、受（shòu）體（tǐ）發情開始時間（jiān）與供體相差不超過早（zǎo）晚12 h、移植8細胞胚等條件，大約75%的受（shòu）體能（néng）夠成功（gōng）妊（rèn）娠。

2.3 胚胎移植的部位

在胚胎移植中，要根據移入胚（pēi）胎的日齡、原來所處的部位來決定移植的部位。一般移植（zhí）部位往往和采集胚胎的（de）部位相對應。即從輸卵管采集的胚胎移植到輸卵管，從子宮角采集（jí）的胚胎移植到子（zǐ）宮角（jiǎo），才能獲得較好的（de）移植結果。胚胎移植到輸卵管時，移植到輸（shū）卵管深部受胎率高（gāo）。胚胎移植到子（zǐ）宮角（jiǎo）時，5~6 日（rì）齡的胚胎移植到輸卵管一側子宮角接合部附近（即子宮角（jiǎo）項部）比子宮角中部有較高的存活率，以後隨日齡的（de）增加，胚胎移（yí）植（zhí）的部位可以相應移向子宮角基部。胚（pēi）胎（tāi）移植到子宮，達到較好受胎率的同步差範圍較輸卵管寬。移植子宮的胚胎，一般是桑椹胚和囊胚。在母羊發情後的第7 天，孕（yùn）酮在卵（luǎn）巢靜脈（mò）內的濃度達到最大濃度，並相對恒（héng）定地（dì）維持到第15 天，因此，在母羊（yáng）發情稍後時期，供體與受體將可能有一段幅度較大的同步（bù）時間，移植成功率較大。

3 胚胎移植數量

移植時胚胎的數（shù）量對受（shòu）胎率有很大的影響。一般雙胚移（yí）植比單胚移植可以獲得（dé）更高的受胎率。

4 胚胎的體外保存

鮮胚移植時，胚胎（tāi）從供體取出後到移植給受體之前，在（zài）體（tǐ）外有短暫停留和保存的時間，這期間胚胎及其（qí）保存液應（yīng）放在密閉的（de）容（róng）器內，防止保存（cún）液的蒸發（fā）和汙染，維持（chí）保存液與胚胎之間（jiān）的滲透壓和無菌，並在適宜溫（wēn）度條件下保存胚（pēi）胎。無（wú）論保存時間長短，要求保（bǎo）存後再移植的胚胎有繼續（xù）發育的能力。在體外培養和保存過程中，pH值的變化對胚胎的生存有較大害處。移植時胚胎（tāi）在體外的溫度迅速下降，移植成功率隨之下降。受（shòu）體在25~30 ℃環境中，移植的成功率較高，而在5~15 ℃環境中，移植的成功率低。

凍胚移植時，胚胎從超低溫環（huán）境（如液氮罐）中（zhōng）取出後要迅速放到37 ℃（經驗表明解凍溫度調（diào）至38~40 ℃時有較好緩衝溫度變化的作用）環（huán）境中解凍，以迅速越過低（dī）溫打擊區，移植後的成功率才高。

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